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羥自由基清除能力測定試劑盒說(shuō)明書(shū)

發(fā)布時(shí)間:2023/11/9      點(diǎn)擊次數:1047

羥自由基清除能力測定試劑盒說(shuō)明書(shū)

微量法100T/96S

 

   :正式測定之前選擇2-3個(gè)預期差異大的樣本做預測定。

測定意義:

羥自由基作用于體內蛋白質(zhì)、核酸、脂類(lèi)等生物分子,造成細胞結構和功能受損,進(jìn)而導致體內代謝紊亂引起疾病。羥自由基清除能力是樣品抗氧化能力的重要指標之一,在抗氧化類(lèi)保健品和藥品研究中得到廣泛應用。

 

測定原理:

H2O2/ Fe2+ 通過(guò)Fenton反應產(chǎn)生羥自由基,將鄰二氮菲- Fe2+水溶液中Fe2+氧化為Fe3+ ,導致536nm吸光度下降,樣品對536nm吸光度下降速率的抑制程度,反映了樣品清除羥自由基的能力。

 

自備實(shí)驗用品:

恒溫水浴鍋、酶標儀、96孔板和蒸餾水。

 

試劑組成和配制:

提取液:液體100 mL×1瓶,4保存。

試劑一:液體12mL×1瓶,4避光保存。

試劑二:液體6mL×1瓶,4避光保存。

試劑三:液體12 mL×1瓶,4保存。

試劑四:液體6mL×1瓶,4保存。

 

樣品的制備:

1.        組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)15~10的比例(建議稱(chēng)取約0.1g組織,加入1mL提取液)進(jìn)行冰浴勻漿,然后10000g,4℃離心10min,取上清,置冰上待測。

2.        血清、果汁等液體樣品可直接測定。

3.        提取物(或者藥物)可配制成一定濃度,如5 mg/mL。

 

操作步驟:

1、   酶標儀預熱30min,調節波長(cháng)至536nm。

2、   工作液配制:使用之前按照每管試劑一:試劑二:試劑三=100:50:100µL的比例配制,用多少配多少,混勻。

3、   EP管中加入如下試劑


空白管

對照管

測定管

工作液(µL

250

250

250

混勻,防止局部顏色過(guò)濃

樣品(µL



50

試劑四(µL


50

50

H2OµL

100

50


混勻,37保溫60min,8000g 25℃離心5min,吸取200μL96孔板中測定536nm吸光值,空白管、對照管和測定管的吸光值分別記為A空、A對和A測。

 

注意:空白管和對照管只需測定一次。

 

計算公式:

羥自由基清除率 D% =A-A對)÷A-A對)×100%

A空、A對、A測:空白管、對照管和測定管的吸光值。

 

注意事項:

為了比較不同樣品羥自由基清除能力,對于同一批樣品必須加入等量的樣品,血清、組織勻漿、果汁等液體樣品加入同樣體積,提取物(或者藥物)配制成同樣濃度。


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