銅藍蛋白(Ceruloplasmin，Cp)測定試劑盒說(shuō)明書(shū)

銅藍蛋白(Ceruloplasmin，Cp)測定試劑盒說(shuō)明書(shū)

                                                  微量法100T/48S

注    意：正式測定之前選擇2-3個(gè)預期差異大的樣本做預測定。

測定意義：

銅藍蛋白是血漿的含銅蛋白，有運輸銅的功能，同時(shí)具有氧化酶的活性，是細胞外液重要的抗氧化劑。

測定原理:

銅藍蛋白催化3,3’,5,5’-四甲基聯(lián)苯胺生成藍色產(chǎn)物，在645nm處有特征吸收峰，依此可得銅藍蛋白活性。

自備實(shí)驗用品及儀器:

天平、可見(jiàn)分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板和蒸餾水。

試劑組成和配制:

試劑一：液體10mL×1瓶，4℃保存。

試劑二：液體7mL×1瓶，4℃保存。

試劑三：液體15mL×1瓶，4℃避光保存。（使用前37℃預熱）

樣本前處理：

1、   血清（漿）等液體樣本：直接檢測。

2、   動(dòng)植物組織樣本：稱(chēng)取約0.1g組織，加入1mL蒸餾水，進(jìn)行冰浴勻漿。10000g ，4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

測定操作表:

1、   分光光度計/酶標儀預熱30min以上，調節波長(cháng)至645nm，蒸餾水調零。

2、   操作表

計算公式:

a.        用微量石英比色皿測定的計算公式如下

1.按體積計算

酶活定義:37℃條件下， 每分鐘每毫升樣品與底物作用吸光度升高0.01為一個(gè)酶活單位。

Cp活力（U/mL）=ΔA×V反總÷0.01÷V樣÷T = 33.33×ΔA

2.按鮮重計算

單位定義：37℃條件下，每分鐘每克樣品與底物作用吸光值升高0.01為一個(gè)酶活單位。

Cp活力（U/g鮮重）=ΔA×V反總÷0.01÷（W×V樣÷V樣總）÷T = 33.33×ΔA÷W

3.按蛋白濃度計算

單位定義：37℃條件下，每分鐘每毫克蛋白樣品與底物作用吸光值升高0.01為一個(gè)酶活單位。

Cp活力（U/ mg prot）=ΔA×V反總÷0.01÷（Cpr×V樣）÷T = 33.33×ΔA÷Cpr

V樣：0.03 mL；V反總：0.3 mL；T：反應時(shí)間，30min；V樣總：加入提取液體積，1mL； Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g

b.       用微量石英比色皿測定的計算公式如下

1、   按體積計算

酶活定義:37℃條件下， 每分鐘每毫升樣品與底物作用吸光度升高0.005為一個(gè)酶活單位。

Cp活力（U/mL）=ΔA×V反總÷0.005÷V樣÷T = 66.66×ΔA

2、   按鮮重計算

單位定義：37℃條件下，每分鐘每克樣品與底物作用吸光值升高0.005為一個(gè)酶活單位。

Cp活力（U/g鮮重）=ΔA×V反總÷0.005÷（W×V樣÷V樣總）÷T = 66.66×ΔA÷W

3、   按蛋白濃度計算

單位定義：37℃條件下，每分鐘每毫克蛋白樣品與底物作用吸光值升高0.005為一個(gè)酶活單位。

Cp活力（U/ mg prot）=ΔA×V反總÷0.005÷（Cpr×V樣）÷T = 66.66×ΔA÷Cpr

V樣：0.03 mL；V反總：0.3 mL；T：反應時(shí)間，30min；V樣總：加入提取液體積，1mL； Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g

注意事項:

試劑二和試劑三有一定的毒性和刺激性，請操作時(shí)做好防護措施。